单细胞测序技术的不断发展解决了以往群体细胞组学分析面临的两个瓶颈:一是大量细胞的混合测序会掩盖细胞间的异质性;二是传统的测序技术需要大量的细胞作为起始,细胞数目稀有的样品则难以研究.利用单细胞测序方法不仅能够揭示组织中的细胞类型和稀有亚群、细胞状态和命运的变化,还可以研究细胞数稀有的珍贵样品,从而帮助人们理解发育、衰老和疾病发展的机制。随着单细胞转录组、基因组、表观遗传组、蛋白组等各组学测序技术的快速发展,研究者开始将它们相互组合,使得单个细胞或同类细胞的多个组学数据能够联合分析.因此,利用单细胞多组学技术能够更有效地研究细胞在特定时空状态下各组学间的复杂联系,从而揭示细胞状态和命运调控的分子机制。单细胞测序是高通量测序下的又一重大技术突破。西安烈冰科技单细胞多组学测序
单细胞多组学技术优势:1. 构建蛋白质数据库,大幅度提高蛋白质鉴定数量;2. 不同层面表达水平分析,构建表达“全景图”;3. 多组学交叉验证:深层次挖掘其中调控机制;4. 对基因突变信息在蛋白水平上进行验证;5.精细医疗:实现genomics到protegenomics的转变。生物领域各个研究方面,1. 农林领域:抗逆胁迫机制,生长发育机制,育种保护研究等;2. 畜牧业:肉类及乳品质研究,致病机理研究等;3. 基础医学、临床诊断:生物标志物,疾病机理机制,疾病分型等;4. 生物医药:药物作用机理,药效评价,药物开发等;5. 微生物领域:致病机理,耐药机制,病原体-宿主相互作用研究等;6. 海洋水产:渔业资源,海水养殖,渔业环境与水产品安全等;7. 生物能源、环境科学领域:发酵过程优化,生物燃料生产,环境危定风险评估研究等;8.食品营养:食品储藏及加工条件优化,食品组分及品质鉴定,功能性食品开发,食品安全监检测等。杭州single cell 单细胞多组学单细胞多组学测序技术是在单细胞分辨率下精确分析细胞异质性和基因调控网络的新技术。
二代测序技术在测序方法上取得了重大突破,基于“边合成边测序”(sequencingbysynthesis)和大规模平行测序技术(massiveparallelanalysis,MPS),使测序通量和读取速度得到极大提升,烈冰生物斥巨资购置的Novaseq6000测序仪的测序原理可以简化为四步:样品文库构建、簇生成、测序和数据分析。由于读长限制,样品DNA或由RNA逆转录得到的cDNA需要被打断成300-500bp的片段,并在3和5端接上3种序列:1)Index,用于区分样品来源;2)Adapter,用于结合测序通道上的位点;3)Primerbindingsite,用于结合PCR引物启动扩增反应。
单细胞测序实验再样本细胞上机分选签,需要对细胞数量、细胞活性进行准确判断,这对SingleCell分选标记、建库、下机数据的质量都具有着决定性的作用。如若细胞计数偏高,将会影响建库的成功率;计数偏低,则会显著提高双细胞的比例;而细胞活率过低,就会使测序数据的利用率大打折扣,因此把好单细胞悬液质量这一关尤为重要。而在铺板过程中,由于不同操作人员手法具有不可避免的差异,不同的液体流速将直接影响单细胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody单细胞分选平台配套了专门定制的电动移液器,其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多种操作模式,来对应各种不同的操作。通过已经设定的程序来控制液体的流速,大幅度降低人为操作习惯带来的差异,保证实验操作的一致性。目前单细胞多组学技术仍然处于技术探索及高通量开发阶段,但应用单细胞多组学分析是研究发展的必然趋势。
空间转录组数据可以用单细胞转录组数据的分析策略进行分析,例如,利用GO和Pathway分析筛选不同发育时期特定空间区域内的信号通路及其关键基因的较大情况,揭示在特定发育时期特定区域内发生的生物学过程。针对任何一个基因,空间转录组可以显示表达该基因的点阵及其空间排布;单细胞转录组可以给出该基因表达的细胞类群;原位测序可以给出该基因在细胞内的表达状况。通过不同发育时间点的信息比较,可以分析细胞类群在某个部位在不同时间点的差异,给出其在细胞内的真实的演变状况。单细胞组学通过一系列测序技术实现高分辨检测单个细胞水平表达谱,以解析细胞异质性及其功能表型。西安single cell RNA单细胞多组学技术支持
首先 出现的单细胞多组学方法就是将转录组与其他组学技术结合。西安烈冰科技单细胞多组学测序
烈冰生信团队倾情研发的NovelBrain®生信大数据分析平台,可实现零代码操作、简单方便:单细胞浏览器的操作简单,不需要命令行操作。简单拖拽、设置参数即可运行,即使生信0基础用户也可以运用自如;可视化展示海量结果文件:可视化展示Cluster的基因数,UMI数量、线粒体RNA占比信息;以及不同Cluster对应的细胞数量、基因表达量、RNA表达量、样本细胞分布、线粒体RNA表达量等;3D立体展示,文章动图先人一步:单细胞浏览器针对t-SNE图、UMAP图和pseudotime结果进行三维立体展示,更加直观立体的观察细胞分布和聚类情况。西安烈冰科技单细胞多组学测序
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